一种利用HPLC-UV鉴别川芎药材贮存年限的方法,它属于中药材品质评价研究领域。该方法包括不同贮存年限川芎药材HPLC-UV方法的建立和对所得的HPLC-UV图谱进行差异分析两部分内容;根据HPLC-UV图谱中的特征峰峰型差异来分辨川芎药材的贮存年限。
1.一种利用HPLC-UV鉴别川芎药材贮存年限的方法,(1)精密称取粉碎后待测川芎药材样品的粉末1g置于烧瓶中,加入40%乙醇100ml,记录其重量,加热回流提取30min或超声提取30min,冷却至室温时用40%乙醇补充损失的重量,随后提取液经0.45μm的微孔滤膜过滤,滤液为供试溶液;(2)按照下述色谱条件对供试溶液进行试验:流动相为0-5min时20∶40∶40的乙腈∶甲醇∶1%乙酸(v/v/v);5.1-30min时60∶0∶40→100∶0∶0的乙腈∶甲醇∶1%乙酸(v/v/v),色谱柱为Diamonsilxa0C₁₈xa0250mm×4.6mm×5μm,检测波长为0-19min在275nm,19.1-30min在260nm,色谱柱温度为25°C,流速为0.6ml/min,得到待测川芎药材样品的HPLC-UV图谱;(3)对所得图谱中出峰时间为21.20min的特征峰进行对比,完整根状茎贮存1年以及粉碎后贮存0年的样品上述特征峰都没有出现双峰现象且均匀对称,而粉碎后贮存1年、2年、3年的样品以及完整根状茎贮存2年、3年的样品上述特征峰都出现了双峰现象。技术领域
本发明属于中药材品质评价研究领域,是一种用于川芎药材的贮存年限鉴别方法。
背景技术
川芎(Ligusticumxa0chuanxiongxa0Hort.)为伞形科藁本属多年生草本植物,以根茎入药,主要药效成分包括挥发油、生物碱、阿魏酸等化合物。川芎具有增加冠状动脉血流量、舒张血管、改善微循环、抑制血小板聚集、拮抗动脉粥样硬化的形成等作用,常用于心脑血管疾病的治疗,如心肌梗塞、冠心病。以川芎为重要组成成分的药品有速效救心丸、冠心宁等,所以川芎药材的品质监测与控制非常重要。目前川芎药材的品质评价主要以《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)2010版一部记载的方法为主,该方法明确指出阿魏酸的含量不得少于0.1%,但是起药效作用的不仅是阿魏酸一种药效成分,还有洋川芎内酯A、洋川芎内酯B、洋川芎内酯C、洋川芎内酯D、洋川芎内酯E、洋川芎内酯F、洋川芎内酯G、洋川芎内酯H、洋川芎内酯I、洋川芎内酯J、洋川芎内酯K、洋川芎内酯L、洋川芎内酯M、洋川芎内酯N、洋川芎内酯Q、洋川芎内酯R、洋川芎内酯S、藁本内酯、欧当归内酯A、川芎嗪等等多种成分,学者们一致认为以某一种或某几种药效成分的含量不足以评价川芎药材的品质,因此有人通过建立HPLC指纹图谱来鉴定川芎药材的综合质量。有研究指出川芎药材中的挥发油类和生物碱类物质会随着贮存时间的增加而大幅降低,所以贮存时间是影响川芎药材品质的重要因素。自2001年12月1日颁布的《药品管理法》规定:上市销售的药品必须标明有效期,但是对中药材及中药饮片没有有效期的规定。由于川芎药材的药效成分会随着贮存时间延长而造成大量损失,直接影响药材自身的质量和临床疗效,所以川芎药材应该有合理的有效期(贮存期)。因此,为了更好的监控其品质,严格鉴别川芎药材的贮存年限就显得非常重要。本发明技术可以把粉碎后贮存1年及1年以上的川芎药材与贮存0年的川芎药材鉴别开来,还可以把完整根状茎贮存2年及2年以上的川芎药材与贮存1年及0年的川芎药材鉴别开来,为川芎药材的贮存年限鉴别提供了新的方法。
发明内容
本发明的主要目的是提供一种鉴别川芎药材贮存年限的方法,将完整根状茎贮存2年及2年以上与贮存1年及1年以内的川芎药材鉴别出来,还可以将粉碎后贮存1年及1年以上与贮存0年的川芎药材鉴别出来。本发明所提供的利用HPLC-UV鉴别川芎药材贮存年限的方法,主要包括不同贮存年限川芎药材HPLC-UV方法的建立和对所得的HPLC-UV图谱进行对比分析两部分内容。首先是川芎药材HPLC-UV方法的建立,将不同贮存年限的川芎药材粉碎后过筛,精密称取药材粉末,加乙醇加热回流提取或超声提取,提取液用微孔滤膜过滤,滤液作为供试溶液;在以下条件分析供试溶液,得到川芎药材的HPLC-UV图谱,并对所得到的不同贮存年限的川芎药材样品图谱进行比较分析,根据特征峰的峰型差异来辨别其贮存年限;分析条件为:流动相0-5min20:40:40(v/v/v,乙腈:甲醇:1%乙酸)、5.1-30min从60:0:40到100:0:0(v/v/v,乙腈:甲醇:1%乙酸),梯度洗脱,色谱分离柱为C₁₈(250mm×4.6mm,5μm),检测波长0-19min275nm、19.1-30min260nm,柱温25°C,流速为0.6ml/min。本发明的优点:本发明通过提供一种利用HPLC-UV鉴别川芎药材贮存年限的方法能够鉴别出贮存时间超过2年(完整根状茎贮存)或1年(粉碎贮存)的川芎药材。1.本发明提供的鉴别方法利用HPLC-UV特征峰的峰型差异来判断其贮存的年限。2.本发明提供的鉴别方法简便可行、直观、稳定、重现性好、易于操作,是一种特征性较强的鉴别方法。3.本发明提供的鉴别方法设计合理,成本低廉。
附图说明
图1为本发明的不同贮存年限川芎药材的HPLC-UV图谱,其中,1为粉碎后贮存3年时的川芎药材图谱,2为粉碎后贮存2年时的川芎药材图谱,3为粉碎后贮存1年时的川芎药材图谱,4为粉碎后贮存0年或完整贮存0年时的川芎药材图谱,5为完整根状茎贮存3年时的川芎药材图谱,6为完整根状茎贮存2年时的川芎药材图谱,7为完整根状茎贮存1年时的川芎药材图谱,椭圆标记的峰为特征峰;图2为川芎药材HPLC-UV图谱中的特征峰的示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明做进一步的详细描述。一种利用HPLC-UV鉴别川芎药材贮存年限的方法,仪器为Agi1ent1100高效液相色谱仪,配有VWD检测器,不同贮存年限的川芎药材样品。首先精密称取粉碎后待测(鉴别)样品的粉末1g置于烧瓶中,加入40%乙醇100ml,记录其重量,加热回流提取30min或超声提取30min,冷却至室温时用40%乙醇补充损失的重量,随后提取液经0.45μm的微孔滤膜过滤,滤液为供试溶液;在流动相为乙腈、甲醇和1%冰乙酸,洗脱方式为0-5min20:40:40(v/v/v,乙腈:甲醇:1%乙酸),5.1-30min60:0:40(v/v/v,乙腈:甲醇:1%乙酸)→100:0:0(v/v/v,乙腈:甲醇:1%乙酸),色谱柱为Diamonsilxa0C₁₈(250mm×4.6mm,5μm),检测波长0-19min275nm、19.1-30min260nm,色谱柱温度25°C,流速为0.6ml/min的条件下分析供试溶液,得到待测川芎药材样品的HPLC-UV图谱;对所得到图谱的特征峰进行对比,粉碎后贮存3年、2年和1年的川芎药材样品HPLC-UV图谱中的特征峰(出峰时间为21.20min)出现双峰现象,即一大峰带一小峰的现象,而粉碎后贮存0年(粉碎后立即测定)的川芎药材样品HPLC-UV图谱中的特征峰没有出现双峰现象且均匀对称,与贮存1年及1年以上的川芎药材样品区别明显;完整根状茎贮存3年和2年的川芎药材HPLC-UV图谱中的特征峰同样出现双峰现象,而完整根状茎贮存1年和0年的川芎药材HPLC-UV图谱中的特征峰没有出现双峰现象且均匀对称,与贮存2年及2年以上的川芎药材样品区别明显。基于上述特征峰的峰型差异来分辨川芎药材的贮存年限。